在很多課題中,細(xì)胞實驗都是*的。除了之前我們介紹的細(xì)胞復(fù)蘇、傳代和凍存這“基礎(chǔ)三件套"之外,還有許多常見的操作,需要我們了解甚至是熟練掌握。
磷脂酰絲氨酸外翻分析:又叫做Annexin V法,常用來檢測細(xì)胞凋亡。
檢測原理:
磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine, PS)正常位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè),但在細(xì)胞凋亡的早期,PS可從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面,暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。Annexin-V是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白,能與PS高親和力特異性結(jié)合。將Annexin-V進(jìn)行熒光素(FITC、PE)或biotin標(biāo)記,以標(biāo)記了的Annexin-V作為熒光探針,利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一種核酸染料,它不能透過完整的細(xì)胞膜,但在凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞,PI能夠透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核紅染。因此將Annexin-V與PI匹配使用,就可以將凋亡早晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開來。
用途:用于區(qū)分早期凋亡的細(xì)胞與晚期凋亡加壞死的細(xì)胞。適合懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞。
特點:某些細(xì)胞的細(xì)胞膜外表面帶有大量的PS,因而也不能使用該方法(比如巨核細(xì)胞、血小板、某些骨髓系細(xì)胞);靈敏度高、方便快捷;只適用于活細(xì)胞,不能用能破壞細(xì)胞膜完整性的固定劑和穿透劑固定或穿膜。
磷脂酰絲氨酸外翻分析
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作為細(xì)胞生長的媒介之一,血清品質(zhì)優(yōu)劣,直接影響細(xì)胞的長勢,從而影響實驗結(jié)果的產(chǎn)出。
因此,挑選一款品質(zhì)優(yōu)異的血清尤為重要。Ausbian進(jìn)口特級胎牛血清,采自5-8個月胎齡牛胚胎中的胎血,出廠前均經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)控,并附詳細(xì)《檢測報告》,如pH值、滲透壓、內(nèi)毒素、病毒檢測、促細(xì)胞生長能力、無菌等檢查,均有詳細(xì)說明。
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