隨著國(guó)內(nèi)生活水平的提升，食品的消費(fèi)量呈逐年上升的趨勢(shì)，但同時(shí)也面臨著食品安全方面的威脅。大腸桿菌O157:H7是一種重要的食源性致病菌，屬于腸桿菌科埃希氏菌屬，是腸出血性大腸桿菌中具代表性的血清型。大腸桿菌 O157∶H7 的主要研究方法有傳統(tǒng)分離鑒定法、分子生物學(xué)法和免疫學(xué)法，根據(jù)同種研究方法的相似原理，搭建不同的檢測(cè)平臺(tái)，來(lái)構(gòu)建致病菌的多種檢測(cè)手段。

傳統(tǒng)分離鑒定法

傳統(tǒng)分離鑒定法需要通過(guò)液體培養(yǎng)基培養(yǎng)提前增菌 10～20 h，然后將其定量涂布到培養(yǎng)皿上，37 ℃培養(yǎng) 18~24 h。利用絕大多數(shù)大腸桿菌O157∶H7 菌株不發(fā)酵山梨醇的特性，可以在山梨醇麥康凱瓊脂（SMAC）培養(yǎng)基上進(jìn)行初步分離，培養(yǎng)的大腸桿菌 O157∶H7 菌落呈無(wú)色半透明。但有其他血清型的大腸桿菌 O157 和革蘭氏陰性菌如變形菌等也不發(fā)酵山梨醇，會(huì)造成假陽(yáng)性。

締一生物向您介紹一款上HiMedia公司的生產(chǎn)的大腸桿菌O157：H7顯色培養(yǎng)基（CT-SMAC平板）貨號(hào)：M1340。該培養(yǎng)基中含有山梨醇和BC指示劑，不含乳糖。大多數(shù)大腸菌群菌株 會(huì)發(fā)酵山梨醇，產(chǎn)生酸。當(dāng)pH值低于6.8時(shí)，培養(yǎng)基中的中性紅會(huì)變成粉紅色。同時(shí)普通大腸桿菌具有ß-D葡萄糖醛酸酶，當(dāng)遇到培養(yǎng)基中BC指示劑時(shí)，會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)綠色。當(dāng)兩種顏色疊加時(shí)，普通大腸桿菌在此種培養(yǎng)基中，會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)紫色。用于從食物和動(dòng)物飼料中選擇性分離大腸桿菌O157:H7。

大腸桿菌O157:H7不發(fā)酵山梨醇，也不具備ß-D葡萄糖醛酸酶活性，因而在此種培養(yǎng)基中產(chǎn)生的菌落為無(wú)色。如果需要，此培養(yǎng)基還可添加 碲酸鹽頭孢克肟添加劑（FD147），可使培養(yǎng)基更具有選擇性。亞碲酸鉀可使大腸桿菌O157選擇性生長(zhǎng)，并抑制嗜水氣單胞菌和普羅維登菌的生長(zhǎng)；頭孢克肟可抑制變形桿菌。

傳統(tǒng)分離培養(yǎng)法的檢測(cè)費(fèi)用低廉，在食品大腸桿菌 O157:H7 的檢測(cè)中作為主要手段，廣泛應(yīng)用于檢測(cè)領(lǐng)域。

分子生物學(xué)檢測(cè)方法

大腸桿菌 O157:H7 的全基因組已獲得，并收錄在 Genebank 中。在此基礎(chǔ)上，大腸桿菌 O157:H7 的檢測(cè)衍生出了一系列分子生物學(xué)方法，主要有聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)（包括普通 PCR、實(shí)時(shí)熒光 PCR、多重 PCR 等）、基因芯片技術(shù)和噬菌體檢測(cè)技術(shù)。

用分子生物學(xué)法檢測(cè)大腸桿菌 O157:H7，檢測(cè)過(guò)程相對(duì)簡(jiǎn)單，檢測(cè)靈敏度較高，但因大腸桿菌 O157:H7 一般在食品中的污染量很低，為保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性仍需要一定的增菌培養(yǎng)過(guò)程，且其檢測(cè)的特異性會(huì)一定程度上受食品成分的影響。

免疫學(xué)檢測(cè)方法

例如免疫膠體金試紙檢測(cè)法 免疫膠體金層析技術(shù)以硝酸纖維素膜為載體，以膠體金作為標(biāo)記物，樣品滴加至微膜孔后，在毛細(xì)管作用下，通過(guò)抗原抗體特異性結(jié)合，利用膠體金顏色反應(yīng)，達(dá)到檢測(cè)抗原或抗體的免疫標(biāo)記技術(shù)。該方法以其檢測(cè)快速、檢測(cè)成本低、靈敏度高、適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)在檢測(cè)領(lǐng)域中快速發(fā)展，但易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。

利用免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)可大大縮短檢測(cè)時(shí)間，提高檢測(cè)靈敏度，但需要高特異性的抗體，同時(shí)對(duì)于不同種類(lèi)的食品需要優(yōu)化不同的對(duì)應(yīng)體系以達(dá)到更好的檢測(cè)效果。